人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。 《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。
故事发生在1896年的纽约，那时的纽约一片繁荣景象，一边是科技的长足进步，一边是贫富差距的加剧。这时发生了一连串男童妓被残忍杀害的事件，新任警察局长（日后的第26任美国总统）西奥多·罗斯福找来了犯罪心理学家拉兹洛·克莱斯勒、记者约翰·摩尔去秘密调查。他们并非孤军奋战，时任局长秘书（日后成为首位女警探）莎拉·霍华德组织了一个行动小组，利用心理学和新兴的法医学，抽丝剥茧，去抓捕这个连环杀手。
产科医生王甫芬（张家辉 饰）天资聪慧，但又傲慢自负，对于女友死在他怀中，而自己却束手无策他始终心存愧疚。八年前，他与心内科医生齐百恒（林峯 饰）一块远赴非洲执行援外仼务，亲眼目睹了人类在大自然中生存的韧性，援外的八年中，他的人生观发生了巨大改变。回港后，他不再为名利所累，一切以病人为中心，在慈善家的资助下，开设了龙城医疗中心，专心致志为病人服务。百恒初入龙城，他十分惊诧甫芬的工作作风，甫芬为病人治疗不惧踏医学雷区，不按常理出牌，但往往效果出人意料的好，久而久之，近朱者赤，百恒被其人道主义精神所感染，更被甫芬“即医病又医心” 的品德所感动......
林初宁（钟丽丽 饰）从小在育婴堂长大不识生身父母，视好友小柔为唯一家人。高老板觊觎美色，一怒之下夺去小柔的性命。林初宁想为小柔报仇，却无奈势单力薄。因为一件信物，林初宁怀疑小柔是陆家的孩子，决定利用陆家力量为小柔报仇。为了打入陆家，林初宁有意接近少东家陆司宴（张逸杰 饰），殊不知陆司宴一心想当飞行员，正需要一个用来拒绝联姻的挡箭牌，于是两人一拍即合，开启了各怀鬼胎的恋爱。不料林初宁在陆家宴会上拿出信物当众认亲，成为了陆司宴的姐姐。昔日恋人重聚同一屋檐下，虽以姐弟相称却暧昧横生，不知内情的陆司宴以为自己对亲姐姐产生爱欲，为此饱受折磨…… 根据小说《闪婚后，我被大叔宠上天》改编。
